胰腺導管腺癌（PDAC）被稱為“癌中之王”，晚期患者中位生存期不足一年。盡管嵌合抗原受體T細胞（CAR-T）療法在血液腫瘤中創(chuàng)造了奇跡，但其在實體瘤尤其是PDAC中的療效始終有限。8月18日，賓夕法尼亞大學Carl H. June教授團隊一項發(fā)表于《Cell Reports Medicine》的1期臨床試驗及后續(xù)機制研究，揭開了PDAC中CAR-T細胞耐藥的面紗，并提出“雙基因編輯”這一潛在突破方向。

從“安全”到“無效”：CAR-T在胰腺導管腺癌（PDAC）的首次大規(guī)模人體試驗

這項由賓夕法尼亞大學團隊主導的研究，納入了9名經至少一線化療失敗的晚期胰腺導管腺癌（PDAC）患者，旨在評估自主研發(fā)的全人源抗間皮素（MSLN）CAR-T細胞（huCART-meso）的安全性與療效。試驗設計了三種給藥方式：靜脈注射（3例）、腹腔灌注（2例）和肝動脈灌注（4例），并允許部分患者在首次給藥后21-42天接受二次靜脈輸注。

安全性方面，研究結果令人欣慰：所有患者均未出現(xiàn)3級以上治療相關毒性，僅2例出現(xiàn)2級細胞因子釋放綜合征（CRS），無神經毒性報告。這與此前其他實體瘤CAR-T試驗中常見的嚴重毒性形成對比，提示局部給藥（如腹腔或肝動脈）可能通過減少“首過效應”降低風險。

但療效卻不容樂觀：9名患者中，僅1例在治療后28天達到疾病穩(wěn)定（SD），其余均在3個月內疾病進展；中位總生存期僅6.7周，中位無進展生存期3.9周。“這與我們在黑色素瘤、卵巢癌等其他實體瘤中的經驗大相徑庭?！毖芯客ㄓ嵶髡咧?、CAR-T領域權威Carl H. June教授表示，“問題顯然出在CAR-T細胞本身或其與PDAC微環(huán)境的相互作用上。”

“冷腫瘤”與“耗竭T細胞”：耐藥的核心密碼

為破解療效困局，研究團隊對患者治療前后的腫瘤組織、外周血及腹腔積液進行了深度分析，揭示了兩大關鍵耐藥機制。

首先，PDAC的“冷腫瘤”特性顯著阻礙了CAR-T細胞的浸潤與激活。所謂“冷腫瘤”，指腫瘤微環(huán)境中T細胞浸潤極少、免疫抑制因子（如TGF-β）高表達的狀態(tài)。研究顯示，所有患者在治療前轉移灶中CD3+ T細胞浸潤極低；即使經過CAR-T治療后，腫瘤組織中的CAR陽性細胞仍難以檢測，部分樣本甚至檢測不到表面CAR表達——這可能是由于CAR-T細胞在腫瘤內“隱身”（如表面CAR下調）或被免疫抑制微環(huán)境“清除”。

其次，CAR-T細胞自身陷入“耗竭”陷阱。通過單細胞RNA測序（scRNA-seq），研究人員發(fā)現(xiàn)，回輸后的CAR-T細胞高表達ID3、SOX4等轉錄因子，以及GZMK（顆粒酶K）等耗竭標志物，形成了典型的“耗竭表型”。這些基因的激活會導致T細胞失去殺傷能力、增殖停滯，甚至轉化為調節(jié)性T細胞（Treg），進一步抑制免疫反應。

這與團隊在實驗室中觀察到的慢性抗原刺激下的CAR-T細胞耗竭高度一致。PDAC的腫瘤微環(huán)境中，間皮素（MSLN）持續(xù)高表達，CAR-T細胞被反復激活，最終”累垮”。

單基因敲除顯效有限，雙基因編輯或成“救星”

基于上述發(fā)現(xiàn)，研究團隊嘗試通過基因編輯阻斷耗竭通路：他們分別敲除了CAR-T細胞中的ID3或SOX4（單敲除，KO），并在小鼠模型中測試其抗腫瘤效果。

結果顯示，單敲除SOX4的CAR-T細胞在小鼠中表現(xiàn)出更強的腫瘤殺傷能力，部分小鼠甚至實現(xiàn)了腫瘤清除；而單敲除ID3的效果則因供體差異波動較大。但遺憾的是，所有單敲除組的小鼠最終仍出現(xiàn)腫瘤復發(fā)——這意味著單一基因干預不足以徹底逆轉耗竭。

研究團隊意識到，ID3和SOX4可能在耗竭過程中扮演“協(xié)同角色”，于是，研究團隊進一步構建了ID3和SOX4雙敲除（DKO）的CAR-T細胞，并在小鼠模型中驗證其長期療效。

關鍵突破出現(xiàn)了：與野生型（WT）或單敲除CAR-T細胞相比，DKO CAR-T細胞在小鼠中誘導了顯著更長的無復發(fā)生存期（RFS）。部分小鼠在治療后6個月仍未出現(xiàn)腫瘤復發(fā)，而對照組（WT）的中位復發(fā)時間僅為2個月。這是首次在PDAC模型中證實，雙基因編輯可顯著提升CAR-T細胞的持久性。

從實驗室到臨床：PDAC CAR-T的未來之路

這項研究為PDAC CAR-T治療提供了多重啟示：

1.優(yōu)化給藥方式：局部灌注（如腹腔或肝動脈）可能比靜脈注射更有效，需進一步擴大樣本驗證；

2.克服腫瘤微環(huán)境：聯(lián)合免疫檢查點抑制劑（如抗PD-1）、靶向TGF-β等藥物，或通過基因編輯增強CAR-T細胞的浸潤能力（如敲除抑制性受體）；

3.雙基因編輯策略：ID3/SOX4雙敲除或類似組合（如NR4A家族基因）可能成為下一代CAR-T細胞的“標準配置”；

4.動態(tài)監(jiān)測耗竭：通過液體活檢（如循環(huán)腫瘤DNA、外泌體）實時追蹤CAR-T細胞的耗竭狀態(tài)，指導個體化治療。

《Cell Reports Medicine》審稿人評論：“這項研究為PDAC CAR-T的臨床轉化提供了關鍵的機制洞見，雙基因編輯策略值得加速推進至臨床前研究。”

從“安全但無效”到“雙基因編輯破局”，這項研究不僅解答了PDAC CAR-T耐藥的部分謎題，更點燃了實體瘤CAR-T治療的新希望。隨著基因編輯技術的進步（如堿基編輯、先導編輯）和多組學分析的深入，未來或許能開發(fā)出“更聰明”的CAR-T細胞——既能精準識別腫瘤，又能在惡劣微環(huán)境中“自我保護”，真正成為PDAC患者的“救命武器”。

備注：Carl H. June 是美國國家科學院院士、賓夕法尼亞大學終身教授，CAR-T細胞療法的創(chuàng)始人之一，被稱為CAR-T之父，他不僅是CAR-T療法的研究先驅，更是推動腫瘤免疫治療進入細胞時代的關鍵人物。

原文鏈接：https://www.cell.com/cell-reports-medicine/fulltext/S2666-3791(25)00374-X

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