撰文丨王聰

編輯丨王多魚

排版丨水成文

2016 年 5 月 2 日，河北科技大學(xué)韓春雨作為通訊作者（高峰為第一作者）在國際著名學(xué)術(shù)期刊Nature Biotechnology 上發(fā)表了題為：DNA-guided genome editing using the

Natronobacterium gregoryi

該研究稱，NgAgo對(duì)真核生物（包括人）具有基因編輯能力。該研究成果很快在世界范圍內(nèi)爆火，韓春雨幾乎一夜之間火遍學(xué)術(shù)界，被贊譽(yù)為“在三流學(xué)校取得世界一流原創(chuàng)成果，打破國際基因編輯技術(shù)壟斷”。

但世界各地的實(shí)驗(yàn)室均為能重復(fù)該研究成果，引發(fā)廣泛質(zhì)疑。2017 年 8 月 3 日，韓春雨撤回了該論文。河北科技大學(xué)的調(diào)查結(jié)論稱，未發(fā)現(xiàn)韓春雨團(tuán)隊(duì)有主觀造假情況。

此后，韓春雨沉寂多年，直到 2022 年 1 月，韓春雨作為通訊作者，高峰作為第一作者，在Nucleic Acids Research期刊發(fā)表了一篇題為：A Cas6-based RNA tracking platform functioning in a fluorescence-activation mode 的最新研究論文。

該研究開發(fā)了一種新的基于 Cas6 的 RNA 熒光追蹤平臺(tái)——Cas6FC，其具有更高的靈敏度和特異性，可在活細(xì)胞中幾乎沒有背景噪聲的檢測目標(biāo) RNA。

近日，韓春雨、高峰在預(yù)印本平臺(tái)bioRxiv發(fā)表了題為 ： Introducing An Argonaute-facilitated Isothermal Amplification Technology 的論文。 該論文的署名單位為杭州微編生物科技有限公司。

該論文介紹了一種等溫Ago-PCR技術(shù)， 該技術(shù)實(shí)現(xiàn)了 65°C 恒溫條件下的核酸模板擴(kuò)增，其核心創(chuàng)新在于以 Argonaute 介導(dǎo)的靶向結(jié)合替代傳統(tǒng)引物退火步驟。這使得等溫 Ago-PCR 不僅擺脫了對(duì)復(fù)雜引物設(shè)計(jì)與精密溫控設(shè)備的依賴，更實(shí)現(xiàn)了擴(kuò)增效率與保真度的雙重提升。該平臺(tái)可在 30 分鐘內(nèi)檢測低至 3 拷貝/反應(yīng)的靶標(biāo)，靈敏度與定量 PCR（qPCR）相媲美且擴(kuò)增動(dòng)力學(xué)更優(yōu)，同時(shí)兼容常規(guī)溫控裝置，這些特性使其具備替代 qPCR 的廣泛應(yīng)用潛力。

研究團(tuán)隊(duì)從嗜熱菌屬中篩選出一種 Argonaute 蛋白——CalAgo。這種蛋白如同“分子剪刀”，能精準(zhǔn)切割特定 DNA 序列。通過對(duì)其關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域進(jìn)行改造（D552A/D622A雙突變），獲得喪失切割能力但保留結(jié)合能力的dmCalAgo。這種改造版蛋白在 65℃ 時(shí)仍保持穩(wěn)定，成為技術(shù)的基石。

技術(shù)突破關(guān)鍵在于三種酶的協(xié)同作用：

1、解旋酶（Tte UvrD）：在 65℃ 時(shí)解開 DNA 雙鏈；

2、改造蛋白（dmCalAgo）：攜帶向?qū)?DNA 精準(zhǔn)錨定目標(biāo)序列；

3、聚合酶（Bst）：以暴露的 DNA 為模板進(jìn)行復(fù)制。

這種設(shè)計(jì)用蛋白介導(dǎo)的靶向結(jié)合替代了傳統(tǒng) PCR 的溫度循環(huán)，首次實(shí)現(xiàn)全程 65℃ 恒溫?cái)U(kuò)增。與傳統(tǒng) qPCR 對(duì)比，這一新技術(shù)展現(xiàn)出顯著優(yōu)勢(shì)：

• 靈敏度：檢出限低至 3 拷貝/反應(yīng)；

• 速度快：30 分鐘內(nèi)完成檢測（比qPCR快1倍）；

• 普適性：可擴(kuò)增環(huán)狀、線狀、質(zhì)粒等各類 DNA 模板；

• 穩(wěn)定性：在55-75℃寬溫度范圍內(nèi)保持活性。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，僅需普通恒溫裝置（例如水浴鍋、保溫杯）即可完成高精度檢測，徹底擺脫對(duì)昂貴 PCR 儀的依賴。這使野外檢測、基層醫(yī)療、家庭自測等場景實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室級(jí)精度成為可能。

韓春雨團(tuán)隊(duì)已對(duì)該技術(shù)申請(qǐng)專利（專利號(hào)：CN116479095A），有望重塑病原體檢測、基因分型、現(xiàn)場快檢等領(lǐng)域。

論文鏈接：

https://academic.oup.com/nar/article/50/8/e46/6513573

https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2025.04.21.649904v1