師妹

你快幫忙看看我 WB 的顯影結(jié)果，這算有條帶嗎？還是我的幻覺

好像有那么一絲非常淡的痕跡，你這結(jié)果用不了的

師姐

師妹

太難了！為了這個(gè)低豐度的靶點(diǎn)，我都快把說明書上建議的抗體濃度翻倍了！買的抗體一個(gè)月就見底，導(dǎo)師已經(jīng)私信警告我了。

試試超敏顯影液呢？賽默飛新出的 SuperSignal? West Femto 超敏底物大包裝，據(jù)說一抗稀釋到 1: 100,000 都能顯出影來！每 100 mL 也就不到 500 元（文末直達(dá)），可比加抗體濃度經(jīng)濟(jì)多了。

師姐

你也總被 WB「虐」到？低豐度靶點(diǎn)表達(dá)微弱、珍貴樣本量不足...... 導(dǎo)致信號(hào)弱，背景糊，數(shù)據(jù)靠「估」，結(jié)論靠「猜」！只能重復(fù)實(shí)驗(yàn) ? 燒抗體 ? 燒時(shí)間 ? 燒經(jīng)費(fèi)。想打破惡性循環(huán)，需精準(zhǔn)定位問題根源。誠(chéng)邀您參與WB 痛點(diǎn)調(diào)研，助力實(shí)驗(yàn)優(yōu)化！僅需 1～2 min 完成問卷可參與抽獎(jiǎng)，贏取實(shí)驗(yàn)室積木、小米吹風(fēng)機(jī)、定制便當(dāng)盒袋、運(yùn)動(dòng)毛巾等好禮，手慢無，掃描下方二維碼，馬上參與！

WB 檢測(cè)低豐度蛋白或微量樣本時(shí)，常面臨信號(hào)微弱甚至無法檢出的挑戰(zhàn)，嚴(yán)重影響數(shù)據(jù)的確定性與可靠性。 獲取清晰、可重復(fù)的強(qiáng)信號(hào)，是得出可靠研究結(jié)論的基礎(chǔ)。要實(shí)現(xiàn)低豐度靶點(diǎn)高質(zhì)量檢測(cè)，需優(yōu)化以下關(guān)鍵環(huán)節(jié)：

高效的蛋白質(zhì)提取

有效的蛋白質(zhì)分離

完全的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移

一抗的特異性

提高檢測(cè)靈敏度

優(yōu)化圖像采集

我們將圍繞核心環(huán)節(jié)及常見問題，為大家系統(tǒng)解析問題成因及優(yōu)化方案，助您提升實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性與數(shù)據(jù)可靠性。

WB 常見問題排查指南

1

非特異或彌散條帶

• 可能原因 1：抗體濃度過高。這種情況可降低抗體濃度，尤其是一抗?jié)舛取?/p>

• 可能原因 2：電泳時(shí)上樣的蛋白質(zhì)過多。解決方案如下：

01. 降低抗體濃度，尤其是一抗?jié)舛?/p>

02. 降低底物的濃度

03. 縮短底物孵育的時(shí)間

04. 降低抗體的濃度，尤其是 HRP/AP 標(biāo)記二抗

2

出現(xiàn)部分顯影區(qū)或空白區(qū)

• 可能原因：轉(zhuǎn)印不完全，解決方案如下：

01. 在轉(zhuǎn)印過程中，使用凝膠滾筒滾壓轉(zhuǎn)印膜組，確保凝膠和膜充分接觸

02. 根據(jù)制造商的說明，潤(rùn)濕和活化膜

03. 處理膜時(shí)，一定要戴上干凈的手套或使用鑷子

3

背景過高

4

信號(hào)微弱或無信號(hào)

最大化檢測(cè)靈敏度——往往是攻克低豐度靶點(diǎn)的核心突破口。那么，如何將檢測(cè)靈敏度拉滿呢？

化學(xué)發(fā)光法是所有現(xiàn)有 WB 檢測(cè)方法中靈敏度最高的。HRP 分子相對(duì)較小，這使得每個(gè) IgG 分子可以偶聯(lián)更多分子，從而比 AP（堿性磷酸酶）系統(tǒng)具有更高的靈敏度。此外，HRP 化學(xué)發(fā)光底物的進(jìn)步和改進(jìn)，使其靈敏度高于其他 WB 檢測(cè)系統(tǒng)。優(yōu)化后的化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)可以檢測(cè)至阿克級(jí)。

飛克級(jí)靈敏度的經(jīng)典 WB 口碑超敏底物SuperSignal? West Femto 超敏底物（貨號(hào)：34098CN）家族上新5 * 100 mL 超值大包裝，嘗鮮價(jià)：2,499 元，每 100 mL 到手價(jià)不到 500 元；掃描下方二維碼，直達(dá)官網(wǎng)詳詢。

SuperSignal? West Femto 超敏底物：面面俱到的六邊形戰(zhàn)士

性能理想

低 fg 級(jí)高靈敏度：真正的飛克級(jí)檢測(cè)；

發(fā)光快、信號(hào)持久、背景低；

節(jié)省抗體。

圖 1. 使用 SuperSignal West Femto 超敏底物實(shí)現(xiàn)真正的飛克級(jí)檢測(cè)

圖 2. 使用 SuperSignal West Femto 超敏底物獲得超高靈敏度和信號(hào)持續(xù)時(shí)間

圖 3. 搭配 SuperSignal West Femto 超敏底物，可節(jié)省抗體

包裝友好

獨(dú)立小瓶裝，通量大實(shí)惠、通量小可分享；

防止 A/B 液交叉污染導(dǎo)致整瓶失效。

價(jià)格親民

每 100 mL 到手價(jià)不到 500 元！

最后，大家別忘了點(diǎn)此 1~2 min 完成問卷，反饋您的 WB 痛點(diǎn)，還可參與抽獎(jiǎng)贏實(shí)驗(yàn)室積木、小米吹風(fēng)機(jī)、定制便當(dāng)盒袋、運(yùn)動(dòng)毛巾等好禮。

內(nèi)容策劃：王丹琦

內(nèi)容審核：吳軍

題圖來源：賽默飛