Western Blot（WB）作為分子生物學(xué)的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)技術(shù)，幾乎是每一位生物學(xué)霸的必修課。它不僅可以檢測(cè)目標(biāo)蛋白的表達(dá)情況，還能通過(guò)條帶的強(qiáng)弱、位置等信息，為研究提供關(guān)鍵線索。

不過(guò)，WB 實(shí)驗(yàn)有時(shí)能讓你欲哭無(wú)淚。今天學(xué)霸君整理了一些當(dāng)代 WB「瘋癲」作品集，順便分享一些經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)，希望對(duì)正在實(shí)驗(yàn)室里「摸魚(yú)」的你有所幫助。

類型一：表情包型結(jié)果

• 跑出驚嘆號(hào)（!）

網(wǎng)友投稿自己的 WB 結(jié)果，像一個(gè)大大的驚嘆號(hào)，條帶清晰，但一點(diǎn)用沒(méi)有。這可能是因?yàn)榈鞍妆磉_(dá)量過(guò)高，或者上樣量過(guò)多導(dǎo)致的。

圖源：網(wǎng)絡(luò)

原因——

蛋白上樣量過(guò)多，導(dǎo)致條帶過(guò)于集中。

目標(biāo)蛋白本身表達(dá)量過(guò)高，掩蓋了其他條帶。

建議——

適當(dāng)減少蛋白上樣量，或者對(duì)樣品進(jìn)行稀釋后再上樣。

如果目標(biāo)蛋白本身就高表達(dá)，可以嘗試降低抗體濃度，避免過(guò)度顯色。

• 跑出鬼臉（-V-）

有的結(jié)果看起來(lái)像是在做鬼臉，條帶扭曲、變形，甚至可能出現(xiàn)奇怪的形狀。這通常是由于電泳條件不穩(wěn)定，或者轉(zhuǎn)膜過(guò)程中出現(xiàn)問(wèn)題。

比如，電泳電壓過(guò)高、時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，或者轉(zhuǎn)膜時(shí)電流過(guò)大，都會(huì)讓條帶變得 「面目全非」。

圖源：網(wǎng)絡(luò)

原因——

電泳電壓過(guò)高或時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，導(dǎo)致條帶變形。

轉(zhuǎn)膜時(shí)電流過(guò)大或轉(zhuǎn)膜時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，導(dǎo)致條帶扭曲。

建議——

降低電泳電壓和時(shí)間，確保電泳條件穩(wěn)定。

在轉(zhuǎn)膜時(shí)檢查電極方向是否正確，避免電流過(guò)大。

使用麗春紅 S 染色檢測(cè)轉(zhuǎn)膜是否完全

類型二：2B 型結(jié)果

并不是在罵人哈，而是條帶宛如 2B 涂卡筆型，糊成一片，背景高到幾乎看不到目標(biāo)條帶，就像是一張被涂黑的試卷，讓人無(wú)從下手。

圖源：網(wǎng)絡(luò)

原因——

抗體濃度過(guò)高，導(dǎo)致非特異性結(jié)合增加。

孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，背景信號(hào)增強(qiáng)。

封閉不充分，膜表面未完全封閉，導(dǎo)致抗體非特異性結(jié)合。

建議——

降低抗體濃度，建議進(jìn)行梯度稀釋以找到最佳濃度。

縮短孵育時(shí)間，避免過(guò)度孵育。

延長(zhǎng)封閉時(shí)間（建議 1 小時(shí)以上），并確保封閉液（如 5% 脫脂奶粉或 BSA）新鮮且均勻覆蓋膜表面

類型三：藝術(shù)型結(jié)果

• 水墨畫

水墨畫型結(jié)果偶爾會(huì)出現(xiàn)，稍顯「隨性」，條帶可能沒(méi)有那么清晰，但整體效果依然很美，給自己的作品定一個(gè)億的價(jià)格不過(guò)分吧

圖源：網(wǎng)絡(luò)

原因——

抗體特異性稍差，或樣品中存在非特異性蛋白。

建議——

選擇特異性更高的抗體，或在樣品處理時(shí)加入蛋白酶抑制劑。

如果背景仍然較高，可以嘗試延長(zhǎng)封閉時(shí)間或降低抗體濃度。

• 抽象藝術(shù)畫

有的結(jié)果看起來(lái)像是抽象派藝術(shù)畫作，條帶形狀奇特、位置不規(guī)則，甚至可能出現(xiàn)一個(gè)黑色的「大泡泡」。

圖源：網(wǎng)絡(luò)

原因——

轉(zhuǎn)膜時(shí)氣泡：膜和凝膠之間存在氣泡，導(dǎo)致顯色異常。

膜或凝膠未充分浸潤(rùn)：局部電流集中，形成顯色圈。

緩沖液不足或不均勻：導(dǎo)致局部電流異常。

建議——

排除氣泡：轉(zhuǎn)膜前確保膜和凝膠緊密貼合，無(wú)氣泡。

充分浸潤(rùn)：確保膜和凝膠完全浸潤(rùn)在緩沖液中。

脫氣緩沖液：轉(zhuǎn)膜緩沖液使用前脫氣處理。

保持濕潤(rùn)：實(shí)驗(yàn)過(guò)程中避免膜干燥。

優(yōu)化條件：適當(dāng)調(diào)整轉(zhuǎn)膜時(shí)間和電流。

類型四：貓貓型結(jié)果

雖然不能用，但很可愛(ài)，有兩個(gè)角角。這種結(jié)果可能是由于蛋白降解，或者樣品處理不當(dāng)，導(dǎo)致條帶出現(xiàn)奇怪的形狀。

圖源：網(wǎng)絡(luò)

原因——

蛋白降解：樣品在處理或保存過(guò)程中發(fā)生降解，導(dǎo)致條帶出現(xiàn)碎片化或異常形狀。

裂解條件不當(dāng)：裂解液配方或裂解時(shí)間不合適，導(dǎo)致蛋白過(guò)度降解或變性。

樣品保存不當(dāng)：樣品在保存過(guò)程中未保持低溫或未添加足夠的蛋白酶抑制劑。

建議——

加入蛋白酶抑制劑：在樣品裂解時(shí)加入適量的蛋白酶抑制劑（如 PMSF、EDTA 等），以防止蛋白降解。

優(yōu)化裂解條件：調(diào)整裂解液配方或裂解時(shí)間，確保蛋白在裂解過(guò)程中保持穩(wěn)定。

今天 WB 結(jié)果圖大賞就到這了，你是否也經(jīng)歷過(guò)類似的「藝術(shù)級(jí) 」WB 結(jié)果，以下這些結(jié)果你都「解鎖」過(guò)哪些呢？

速來(lái)投票！！

如果你還有其他有趣的結(jié)果，也歡迎分享你的「WB 藝術(shù)作品」！一起交流經(jīng)驗(yàn)，早日告別「瘋癲」條帶，擁抱「夢(mèng)中情帶」！

題圖來(lái)源：圖蟲(chóng)創(chuàng)意

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